1、材料和方法
　　1.1　猪只选择和标本采集 
　　选择成年、健康、无病、营养优良的商品肥育猪（长×本）共选10例，1月内没有使用抗生素史，体重80-90公斤，活猪急宰后，立即将空肠和直肠段封闭，运送至实验室。以无菌操作从小肠和直肠分别采集肠内容物和粪便各1克，放入盛有稀释液的试管中，经旋涡震荡器震荡5-10分钟，再作10倍递进稀释。
　　1.2　标本稀释、接种和培养 
　　采集的标本，用稀释液分别稀释成10^-3~10^-8，然后选用适当的稀释度，分别滴种在BHI、BS、CO、LS、KV平板上，每个稀释度各滴三滴、置于Forma Anaerobic System 1028型厌氧手套箱行厌氧培养，37℃培养72小时仅仅CO平板放入国产厌氧培养箱，42℃培养72小时。观察初代培养和计数。各种特种性菌落挑取3-5接种到BHI血板上，一式二份，一份作需氧培养，另一份作厌氧培养，凡需氧和厌氧培养都生长的为兼性菌，3次以上需氧培养不生长，而厌氧培养生长的菌株定为专性厌氧菌，并作系列鉴定。
　　1.3　拟杆菌、乳杆菌、双歧杆菌和弯曲杆菌鉴定，包括菌落特征，菌体形态，革兰氏染色，耐氧试验和微量快速生化反应及IC分析等。
　　1.4　标准菌株 
　　从中科院微生物研究所引进标准菌种，以相同方法厌氧培养48小时，取培养物10-20倍稀释后行IC分析，作为标准对照。
　　1.5　准脂肪酸的配制和IC分析，按《厌氧菌分离鉴定法》一书的方法配制脂肪酸，除混合标准脂肪酸外，都经10-20倍稀释后做IC分析。并作单一标准脂肪酸IC分析。
空白BHI或PYG培养的IC分析，用以校正待检菌株挥发性脂肪酸（VFA）和非挥发性脂肪酸（NVFA）的产量。
　　1.6　IC分析（离子色谱分析法）酸采用仪器和条件，使用成都解放仪表厂生产的SL-1型离子色谱仪。100×8mm（内径）色谱柱，分离树脂为天津化学试剂二厂生产的YSG-SO3-H+脂后填柱。洗脱液（流动相）为0.4M H3PO3和0.1M HNO3（1:1），量程2，衰减1/128，流量选择为0.6毫升/分，流量指示27毫升，低速0.2厘米/分，进样量10-20uL/次。
　　1.7　培养基及培养对象（见表1）

表1培养基及培养对象

　　2、结果
　　2.1　猪不同肠道四种厌氧菌定量结果。见表2。

表2  猪不同肠道四种厌氧菌的分离率及定量结果

　　表2说明，乳杆菌（Lactobacilus），双歧杆菌（Bifido bacterium），拟杆菌（Bacteroides）和弯曲杆菌（Campylobacter）在空肠和直肠的分离率为90-100%，证明这四种菌群系猪的肠道正常菌群；厌氧菌总数在直肠为9.18±1.21，空肠为8.16±0.73，前者高于后者（P<0.01）；乳杆菌和双歧杆菌的菌数均值，在直肠分别为8.27±1.23，8.13±1.75，小肠为7.42±1.2，7.33±1.06，即乳杆菌和双歧杆菌的菌数均值，直肠高于空肠（P<0.01），而拟杆菌和弯曲杆菌的菌数均值在空肠和直肠无显著差异（P>0.05）。
2.2猪肠道四种厌氧菌属分别检出种的结果见表3，4，5。弯曲杆菌在空肠10个标本中均检出空肠弯曲杆菌，在直肠10个标本中均检出结肠弯曲杆菌。

表3  猪空肠和直肠双歧杆菌种的检出的结果

注：细菌的检出量用cfu（细菌形成单位）的对数值log¹⁰表示，表4、5相同。B.g为球双歧杆菌，B.b为短双歧杆菌，B.a为青春双歧杆菌，B.m为小双歧杆菌，B.t为嗜热双歧杆菌。

表4  猪空肠和直肠乳杆菌种的检出结果

注：L.p为植物乳杆菌，L.a为嗜酸乳杆菌，L.b为短乳杆菌，L.f为发酵乳杆菌，L.c为干酪乳杆菌，L.bu为布氏乳杆菌，L.ba为保加利亚乳杆菌。

表5  猪空肠和直肠拟杆菌种的检出结果

注：B.f为脆弱拟杆菌，B.t为多型拟杆菌，B.d为吉氏拟杆菌，B.o为卵型拟杆菌，B.r为栖瘤胃拟杆菌，B.u为单形拟杆菌，B.a为不解糖拟杆菌。
　　表3、表4、表5说明，双歧杆菌属在空肠和直肠均能检出球双歧杆菌等6个种，但检出率最高的在空肠有短双歧杆菌及嗜热双歧杆菌，直肠有球双歧杆菌及双歧双歧杆菌（检出率均为4/10）。乳杆菌属在空肠检出植物乳杆菌等7个种（共17株）；直肠检出发酵乳杆菌等5个种（共19株），未检出嗜酸乳杆菌及布氏乳杆菌，检出最高的在空肠有植物乳杆菌（5/10）及干酪乳杆菌（4/10），直肠有植物乳杆菌（6/10）、发酵乳杆菌（5/10）、干酪乳杆菌（4/10）。
　　拟杆菌属在空肠检出多型拟杆菌等6个种（共21株）未检出不解糖拟杆菌；在直肠检出脆弱拟杆菌等4个种（共15株），未检出吉氏拟杆菌、栖瘤胃拟杆菌及单形拟杆菌；检出率最高的在空肠有多型拟杆菌（6/10），脆弱拟杆菌（5/10）及卵型拟杆菌（5/10），直肠有脆弱拟杆菌（5/10）及多型拟杆菌（5/10）。
　　2.3　猪肠道4种厌氧菌属代表菌株定性结果，见表6，7，8，9。

表6  猪肠道乳杆菌代表菌株定性结果

表7  猪肠道双歧杆菌代表菌株定性结果

表8  猪肠道拟杆菌代表菌株定性结果

表9  猪肠道弯曲杆菌代表菌株定性结果

注：生化试验编号如下：1.阿拉伯糖 2.纤维二糖 3.半乳糖 4.甘油 5.乳糖 6.麦芽糖 7.甘露醇 8.棉子糖 9.鼠李糖 10.水杨酸 11.葡萄糖 12.山梨醇 13.蔗糖 14.罩糖 15.木糖 16.触酶 17.七叶苷水解 18.尿素酶 19.靛基质 20.硝酸盐还原 21.松三糖 22.核糖 23.菊粉 24.淀粉 25.甘露糖 26.精氨酸水解； A（乙酸）P（丙酸）iB（异丁酸）B（丁酸）iv（异戊酸）V（戊酸）L（乳酸）S（琥珀酸）F（甲酸）PA（苯丙酸）。
　　表6-9说明，猪肠道4种主要厌氧菌群，通过细菌菌落及菌体形态观察，微量快速的酶学生化试验，离子色谱分析厌氧菌代谢产物等法，证明在猪的肠道，乳杆菌属有嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、短乳杆菌及布氏乳杆菌7个种；双歧杆菌属有短双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、青春双歧杆菌、双歧双歧杆菌、球双歧杆菌、小双歧杆菌6个种；拟杆菌属有脆弱拟杆菌、多型拟杆菌、卵型拟杆菌、栖瘤胃拟杆菌、吉氏拟杆菌、单形拟杆菌和不解糖拟杆菌7个种，弯曲杆菌属有空肠弯曲杆菌及结肠弯曲杆菌2个种。
　　3、结论和讨论
　　3.1　本研究通过定位、定量和定性调查了猪空肠和直肠每克内容物中乳杆菌、双歧杆菌、拟杆菌和弯曲杆菌四种专性厌氧菌的正常菌数及其包括的种。调查结果证明，在猪的肠道，乳杆菌属有嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、短乳杆菌及布氏乳杆菌7个种；双歧杆菌属有短双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、青春双歧杆菌、双歧双歧杆菌、球双歧杆菌、小双歧杆菌6个种；拟杆菌属有脆弱拟杆菌、多型拟杆菌、、栖瘤胃拟杆菌、吉氏拟杆菌、单形拟杆菌和不解糖拟杆菌7个种，弯曲杆菌属有空肠弯曲杆菌及结肠弯曲杆菌2个种。然而他们在肠道中的定位及其所处的地位有所不同，双歧杆菌属在空肠和直肠均检出6个种，空肠内占优势的为短双歧杆菌及嗜热双歧杆菌，直肠内占优势的为球双歧杆菌及双歧双歧杆菌；乳杆菌属在空肠检出7个种，直肠检出5个种（未检出嗜酸乳杆菌及布氏乳杆菌），在空肠及直肠均占优势的为植物乳杆菌和干酪乳杆菌，唯发酵乳杆菌在直肠占优势；拟杆菌属在空肠检出6个种（为检出不解糖拟杆菌），直肠检出4个种（未检出吉氏拟杆菌、栖瘤胃拟杆菌和单形拟杆菌），在空肠及直肠均占优势的为脆弱拟杆菌及多型拟杆菌，唯卵型拟杆菌在空肠占优势。
　　3.2　乳杆菌、双歧杆菌、拟杆菌及弯曲杆菌的分离率：乳杆菌、拟杆菌在空肠和直肠的分离率为100%；双歧杆菌及弯曲杆菌在直肠的分离率为100%，空肠的分离率为90%；可以认为此四种菌群是猪的肠道正常菌群。这与Mitsuoka（1977）及何明清（1986）调查猪肠道的乳杆菌、双歧杆菌及拟杆菌分离率相一致，进一步证明这一判断的可靠性。该结果与何明清等（1986，1991）调查鸡、鸭肠道的乳杆菌、双歧杆菌及拟杆菌分离率相一致。但与鸡、鸭的弯曲杆菌分离率（在直肠为73-70%，空肠为80-33%），有差异。
　　乳杆菌等的菌数均值，在直肠：乳杆菌（8.27±1.23），双歧杆菌（8.13±1.75），拟杆菌（7.46±1.1），与何明清等（1986）调查猪直肠的乳杆菌（8.2±0.7）、双歧杆菌（8.6±0.9）相一致，但与拟杆菌（8.2±1.1）有明显差异（P<0.05）。在空肠：乳杆菌（7.42±1.2）、双歧杆菌（7.33±1.1）、拟杆菌（7.34±1.0）与何明清等（1986）调查猪空肠的双歧杆菌（7.2±0.7）相一致，但与乳杆菌（6.2±1.1）、拟杆菌（5.0±1.1）有显著差异（P<0.01）。出现上述差异的原因可能与猪的年龄有关，本次调查的猪系肥育猪，年龄在12个月以上，1986年调查的猪是仔猪日龄为1-28天。
　　3.3　本研究采用离子色谱分析法（IC分析法）采用细菌代谢产物结合微生物学，生化学特征鉴定所分离的细菌，其结果是可靠的，IC分析法较GLC分析法快速、敏感。