芽孢杆菌对生长肥育猪肠道菌群及酶活性的影响返回列表
有关微生物添加剂的使用效果，国内外报道很多。总的来说此类饲料添加剂产品的使用都是正效应。饲用微生物添加剂可以提高畜、禽日增重2-30%，平均11.15%；提高饲料转化率2.6-26%、平均8.18%。其中对猪饲用芽孢杆菌类微生物添加剂，可提高猪日增重6-7%，提高饲料转化率4%，但对起在机体内作用机制研究还极少。
芽孢杆菌是一类耐高温、高压及低PH值的微生物添加剂，不论在颗粒或液状饲料中多比较稳定，而且还具有很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，从而可提高饲料转化率。因此此类微生物添加剂应用于动物的效果优于其他菌剂。本研究用三组不同芽孢杆菌饲喂生长肥育猪进行对比试验，探讨芽孢杆菌对生长肥育猪肠道菌群数量及消化酶活性的影响。
1、材料与方法
1.1 材料：
1.1.1 试验猪及处理：试验设3个试验组（分别用代号为A、B、C三种不同种类的芽孢杆菌饲喂），1个对照组。选用健康长白×荣昌杂交猪40头，按性别，体重随机分组，每组10头（公母比6：4），每组设5个重复，每重复2头。预饲10天，预饲期内进行防疫注射、驱虫并对个体差异较大的猪进行个别调整式淘汰。试验初始体重为19.8kg，结束体重90 kg。每个重复圈面积为3×1.4平方米，水泥圈墙，石地板，每圈有贮料箱和自动饮水器。试验期间舍内平均气温为11.3℃。试验的基础日粮按中等营养水平配制，饲粮组成及营养成分见表1。试验猪自由采食干粉料，自由饮水。
1.1.2 样品来源：从各组中随机取3头猪屠宰（共12头），立即从十二指肠，空肠中无污染采集适量内容物装冰瓶送实验室检测。
1.2 方法
1.2.1 菌数测定
1.2.2.1 培养基及培养方法：根据不同的菌采用不同的培养基和培养方法，见表2。
1.2.1.2 采用10倍递进稀释法对样本进行稀释，取不同稀释度滴种、培养，计算出每克肠内容物中的菌落数（对数均值），测定结果见表3。
1.2.2 酶活性测定
1.2.2.1 酶液制备：将猪肠内容物经冷冻离心（0-4℃，8000转/分，离心10分钟），取上清液1mL，加20 mL生理盐水稀释（简称酶液）。
1.2.2.2 α-淀粉酶活性测定
1.2.2.2.1 在试管中加入1%可溶性淀粉5mL，PH7.0的磷酸缓冲液4mL，37℃恒温水中预热，小比色磁盘中先加入1/500N碘液0.5mL备用。
1.2.2.2.2 在37℃预热的淀粉液中，分别加入上述酶液1mL，使之反应，定时吸0.5mL入小孔内，观察颜色的变化，测定反应液的呈色度达到标准度（红色，碘液的颜色作标准）相同时的时间。在此条件下，以反应液的碘反应呈色，在10分钟内与标准色一致时的酶的活性作为1 个糊精化活力单位。
1.2.2.2.3 蛋白质含量测定：用Foin—酚试剂法测样液中蛋白质含量，用于计算胰蛋白酶的比活力。
1.2.2.2.4 胰蛋白酶活性测定
取酶液1.0mL，然后在每个样品管中加入1.0mL预先在37℃保温的1%酪蛋白溶液，混匀。在37℃保温10分钟，立即各加入3.0mL5%三氯乙酸，迅速摇匀，室温放置半小时。空白管先加入1.0mL1%酪蛋白溶液和3.0mL5%三氯乙酸，摇匀后，再加入1.0mL酶液，在37℃保温10分钟，以下操作同样品管。
将样品管、空白管分别离心，取上清液于280nm处测其光密度，计算比活力。
表1 试验饲粮配方及营养成分（%）
表2 培养基及培养方法
表3 肠道菌群计数表（log10n/克肠内容物）
2、结果
由表3可见：A组双歧杆菌为9.0±0.3，比对照组7.6增加18.4%差异显著（P<0.05）。芽孢杆菌和乳酸杆菌比对照组也有增加，但差异不显著（P>0.05）。大肠杆菌略有下降，分别为5.3±0.6和4.9±0.7，其差异不显著（P>0.05）。B组，芽孢杆菌为6.5±0.3，比对照组5.4±0.9增加20.4%，差异显著（P<0.05）。双歧杆菌，乳酸杆菌也有增加，但差异不显著（P>0.05）。C组芽孢杆菌6.6±0.2比对照组5.4±0.9增加22.2%；双歧杆菌为8.6±0.4，增加13.2%，两者差异显著（P<0.05）；而乳酸杆菌下降分别为5.3±0.6和4.6±0.8），但差异不显著（P>0.05）。可见，饲喂A、C组芽孢杆菌添加剂，能增加生长肥育猪肠道内双歧杆菌的数量，B组能降低大肠杆菌的数量。
由表4可见，A组α-淀粉酶活比对照组高6.9个酶活力单位，C组增加0.9个酶活力单位，但B、C两组差异均不显著（P>0.05）。A组胰蛋白酶活较对照组有增加（>0.05），而B、C组比对照组降低，但是差异不显著（P>0.05）。
表4 肠道α-淀粉酶、胰蛋白酶活性1
注：1、肠道酶活力为每头猪十二指肠和空肠酶活力的平均值；2、每毫升肠内容物分离液中含α-淀粉酶的活力单位数；3、每毫升肠内容物分离液中含胰蛋白酶的比活力。
3、讨论
本试验表明，对生长肥育猪饲喂芽孢杆菌添加剂后，A组双歧杆菌，B组芽孢杆菌均有显著增加，而C组两种菌都有显著增加。饲喂A、C两组芽孢杆菌添加剂，能使生长育肥猪双歧杆菌，乳酸杆菌的数量增加。厌氧菌的增加，是由芽孢杆菌以孢子状态进入育肥猪肠道后生长繁殖，不利于大肠杆菌等的生长。从试验结果中看出，A、B、C组芽孢杆菌添加剂均使生长育肥猪大肠杆菌的数量减少，此结果与有关微生物添加剂对猪肠道菌群影响类似，Wheeler（1986）发现，把芽孢杆菌的孢子加到母猪饲料中，母猪粪便中大肠杆菌的含量减少到原来的2%。Gedek（1978）认为，每克饲料中含106个芽孢杆菌的孢子，可使仔猪粪中的大肠杆菌数比对照组减少35%。
本试验结果还表明，生长育肥猪饲喂芽孢杆菌添加剂A后，α-淀粉酶活性比对照显著增加。剂延贺（1994）报道，饲喂A组芽孢杆菌添加剂可使生长育肥猪饲料转化率提高6.8%。说明在饲料中添加A组芽孢杆菌能使生长育肥猪肠道内碳水化合物分解速度加快，提高饲料转化率。饲料利用率的提高与微生物添加剂在机体肠道内产生各种消化酶有关。
Collington（1990）报道仔猪饲喂微生物添加剂还可使仔猪肠内的蔗糖酶，乳糖酶，三肽酶的活性增加。由于每组仅采三头猪屠宰，测样重复数据较少，本试验值得进一步研究。